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酶標(biāo)儀使用注意
發(fā)布日期： 2022/10/13 17:21:29

酶標(biāo)儀（Microplate Reader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)是通過偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。
酶標(biāo)儀的工作原理
    使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
檢測(cè)單位：
光通過被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
檢測(cè)單位用OD值表示，OD是opticaldelnsity（光密度）的縮寫，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度，OD=10g（1/trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E=OD=logⅠ0/Ⅰ其中E表示被吸收的光密度，Ⅰ0為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ⅰ為從被檢測(cè)物出來的光強(qiáng)度。
OD值由下述公式計(jì)算：
E=OD=C×D×E
其中：C為檢測(cè)物的濃度；D為檢測(cè)物的厚度；E為摩爾因子。
在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱為測(cè)量波長(zhǎng)。
但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
酶標(biāo)儀維護(hù)保養(yǎng)注意事項(xiàng)：
    1、儀器應(yīng)放置在無磁場(chǎng)和干擾電壓，低于40分貝的環(huán)境下；
    2、應(yīng)避免陽(yáng)光直射以防止設(shè)備老化；
    3、操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間；
    4、運(yùn)行中操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定；
    5、操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵；

    6、保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，足夠大的操作空間；

    7、使用加液器加液，加液頭不能混用；

    8、盡量配套使用洗板機(jī)洗板，能有效避免交叉污染；
    9、在測(cè)量過程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手；
    10、請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手；
    11、如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒的操作說明，以防對(duì)操作人員造成損害。
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